常規生物學實驗中，實時定量PCR技術（RT-PCR）普遍用于microRNA的檢測實踐中，但外泌體樣品中的microRNA豐度極低，普通RT-PCR技術的靈敏度已經不能夠滿足。第三代微滴式數字PCR——ddPCR技術，成為外泌體microRNA檢測的選擇技術。微滴式數字PCR（DropletdigitalPCR），又成為“油包水PCR”，在傳統的PCR擴增前對樣品進行微滴化處理，即將含有核酸分子的反應體系分成成千上萬個納升級的微滴，其中每個微滴或不含待檢核酸靶分子，或者含有一個至數個待檢核酸靶分子。經PCR擴增后，逐個對每個微滴進行檢測，有熒光信號的微滴判讀為1，沒有熒光信號的微滴判讀為0，根據泊松分布原理及陽性微滴的個數與比例即可得出靶分子的起始拷貝數或濃度。外泌體具有異質性，即使是同一種細胞分泌的外泌體都有可能具有比較大功能區別。細胞外泌體NTA

細胞外囊泡是蛋白質、mRNA、miRNA和脂質運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介，根據它們的大小和發生分為三類，包括外泌體、微泡和凋亡小體。其中，外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡，由多種細胞分泌，內含有特定的蛋白質、脂質、細胞因子或遺傳物質。來源于不同的組織的外泌體不只具有其特異性蛋白分子，而且還包含其行使功能的關鍵分子。近年來，隨著外泌體研究的不斷深入，它的應用已經涉及瘤子診療領域、醫學基礎和免疫領域、寄生蟲領域；臨床研究上已涉及心血管系統、內分泌代謝系統等。超速離心是目前分離外泌體的主要技術。exosome外泌體膜中有膜轉運融合蛋白annexins、RAN、GTPases。

AFC自動收集器是將qEV分離法這一過程自動化的儀器，將用來收集外泌體樣本的微量離心管放置在AFC的中間轉盤內，根據稱重精確測量流體體積，可精確的測量到樣品中每一個液滴的重量并精確測量總重量。將在空隙體積之前從qEV柱洗脫的流體收集到AFC轉盤的單獨中心孔中并送至廢液桶，避免將不需要的空隙部分收集到微量離心管中。在提取期間，當達到設定的提取體積后，轉盤會自動旋轉到下一個微量離心管繼續收集，到收集完成后自動停止。微滴式數字PCR技術不佳有效提高了核酸分子的擴增效率，而且由于采用微滴計數的方法進行定量，可以不依賴與RT-PCR的熒光信號和Ct值，對所測樣品中的核酸分子進行一定定量。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式：1、免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態的完整，特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性，不便進行下一步的實驗。2、PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態完整，純度較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細胞共培養和體內注射。3、色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設備，應用不普遍。外泌體作為核酸的藥物遞送載體。NTA技術已被作為外泌體表征手段之一。

外泌體的基本信息：1、外泌體的大小：外泌體的直徑約40-150nm。2、從研究上來講并不太嚴格區分外泌體或微泡。3、外泌體屬于胞外囊泡類，除了外泌體之外細胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡。4、外泌體的直接比微泡的要小，后者直徑為100nm-1μm。5、外泌體的數量：人體中大約有1014個，近乎于平均每個細胞產生1000-10000個。6、外泌體的細胞源：人體中幾乎所有類型的細胞均能產生外泌體。7、外泌體具有異質性，即使是同一種細胞分泌的外泌體都有可能具有比較大功能區別。8、外泌體的存在：外泌體幾乎存在于所有的組織、細胞間隙、體液中。9、外泌體產生于細胞中的多泡體。外泌體可以將PD-L1轉運至其他PD-L1表達低或沒有PD-L1的細胞，并可能與PD-1結合。干細胞外泌體提取試劑盒

外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結合，從而活躍細胞內的信號通路。細胞外泌體NTA

外泌體中常見的細胞質蛋白是Rabs蛋白，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。它可以調節外泌體膜與受體細胞的融合，有文獻報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現在早期以及回收的核內體中，RAB7和RAB9主要出現在晚期的核內體。現有大量的研究發現外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白，外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯蛋白（包括膜聯蛋白1、2、4、5、6、7、11等）。外泌體膜上富含參與外泌體運輸的四跨膜蛋白家族（CD63,CD81和CD9)）、熱休克蛋白家族（(HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細胞特異性的蛋白包括A33（結腸上皮細胞來源）、MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源)、CD86(抗原提呈細胞來源)以及乳凝集素（不成熟的樹突狀細胞）。細胞外泌體NTA

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