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來源: 發布時間:2024-06-02

納米顆粒的尺寸很小,但它們比其他顆粒具有更大的粘附表面,同時具有高穩定性。正因為如此,它們能夠成功地穿過細胞膜,進入細胞,并與自然發生的細胞內途徑結合,具有將特定顆粒帶到預定目標位置的***準確性。由于納米顆粒在細胞內運輸和保護化合物方面具有巨大的潛力,可以避免酶的消化或儲存在核內體中,因此納米顆粒作為細胞過程成像的工具,作為將藥物攜帶到細胞內的各種系統的一部分,或**終用于基因傳遞。納米顆粒通過官能團和非共價鍵之間的特異性和非特異性鍵與核酸結合的特性類似于體內DNA和抑制蛋白之間的自然結合。在細胞內運輸外源DNA的效率受到兩個主要因素的限制:內吞作用,穿過細胞膜的方式,或適當的細胞受體***和內體屏障的破壞。研究表明,在細胞內,與熒光標記物連接的納米顆粒聚集在靠近細胞核的溶酶體中,但它們不會穿過核膜。事實上,這并沒有干擾特定基因結構編碼的蛋白質的表達,這證明了納米顆粒可以參與內體途徑,并可以通過細胞質將DNA運輸到細胞核。不同種類的化學物質有不同的納米粒子,它們具有不同的性狀、化學性質、物理性質和結構。流式細胞術可以更精確地定量表達特定熒光基因的細胞,以評估轉染效率。遼寧肺轉染試劑

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基因和RNAi***在臨床上的應用需要安全高效的載體。迄今為止,核酸***的兩種主要方法是基于病毒和非病毒載體。與病毒載體相關的安全問題有很多:誘導免疫反應的風險、不必要的突變和**。因此,在開發基于脂質或聚合載體的非病毒載體是勢在必行的。1965年,Vaheri和Pagano引入了二乙基氨基乙基修飾的葡聚糖,這是第一種用于基因傳遞的聚合物。1987年,Felgner引入了DOTMA,這是第一種用于DNA轉染的陽離子脂質。從那時起,大量不同的脂質和聚合物被開發出來。南京星葉生物正是利用將核酸封裝在納米級脂質體囊泡中的技術,開發出了Gemate系列轉染試劑。肝臟轉染試劑企業納米顆粒的主要特性使它們能夠用于細胞轉染。

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RNA和信使RNA與DNA轉染類似,RNA可以通過基于RNA的病毒或非病毒載體導入真核細胞。與涉及DNA的轉染相比,RNA轉染可能產生更高的轉染效率,因為后者不需要穿越核膜。在不需要基因組整合、轉錄和轉錄后處理的情況下,RNA轉染也可能加速所需蛋白質的產生。使用基于信使RNA(mRNA)的載體也可以防止因整合到宿主基因組而引起的并發癥,從而允許表達特定的,所需的蛋白質。然而,RNA轉染后,蛋白質表達是短暫的,與DNA相比,RNA的穩定性相對較差,因此在細胞內運輸時更容易降解。小RNA是長度為18-200個堿基對(bp)的RNA分子,具有調控轉錄后基因調控和RNA修飾的能力。小RNA包括microRNAs(miRNAs)、小干擾RNA(siRNA)、短發夾RNA(shRNA)等。microRNAs和piRNAs都是內源性單鏈小RNA。miRNAs(18-25bp)通過抑制目標mRNA或干擾其翻譯起始,參與下游mRNA的轉錄后調控。與miRNAs和piRNAs類似,siRNA也在調控轉錄后基因表達中發揮作用。siRNA的長度通常為20-24bp,可表達為內源性或外源性雙鏈小RNA。shRNA是一種具有發夾環的內源性雙鏈小RNA。shRNA可以結合mRNA上的互補序列來降解它。

PHP是由天然來源的羥基脯氨酸(如膠原蛋白、明膠和其他蛋白質)制成的,是***個用作基因載體的聚酯。在生理環境中,PHP可以在不到兩個小時的時間內失去其初始分子量的50%。然而,PHP完全分解為其等效單體需要三個月的時間,分解產物是單體羥脯氨酸。雖然PHP酯在溶液中單獨存在時降解很快,但與DNA絡合時更穩定。將PHP酯/pSV-gal復合物轉染CPAE細胞,測定PHP酯作為基因傳遞載體的活性。由于聚L-賴氨酸是**常用的基因轉運聚合物,PHP酯的轉染效率與聚L-賴氨酸相當。轉染效果隨著PHP酯濃度高于DNA濃度而增加。PHP酯轉染細胞的能力不受FBS存在的影響。結果表明,PHP酯是一種潛在的基因載體。小RNA和質粒DNA的共轉染可用于評估轉染效率。

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轉染時通常推薦使用血清減少或無血清培養基,包括陽離子轉染試劑,如Lipofectamine、HiperFect 和EndofectinMax。這種轉染活動需要形成陽離子脂質體-DNA復合物,這需要帶正電的脂質體分子和帶負電的核酸之間的相互作用。因此,血清中負電荷分子的存在可能會影響這種復雜的相互作用,從而影響轉染效率。然而,發現10%血清的存在導致FuGENE HD、jetPEI、Lipofectamine 2000和Arrest-In轉染MCF-7、HeLa、C2C12和MC3T3的轉染效率更高。研究表明,轉染中少量的血清可以通過調節轉染復合物的zeta電位來改善轉染復合物與其宿主細胞表面之間的表面相互作用。轉染是將外來核酸傳遞到真核細胞中以修飾宿主細胞的遺傳組成的過程。重慶PEI 轉染試劑

為了在體外和體內可重復地傳遞基因和siRNA,含有核酸的脂質體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉染試劑。遼寧肺轉染試劑

基于非病毒的轉染方法可以進一步分為物理/機械方法和化學方法。常用的物理/機械轉染方法包括電穿孔、聲孔、磁***、基因顯微注射和激光照射。電穿孔是一種常用的物理轉染方法,利用電壓瞬間增加細胞膜通透性,允許外來核酸進入。這種方法通常用于轉染原代細胞、干細胞和B細胞系等難以轉染的細胞。然而,使用高壓可能導致細胞壞死、凋亡和長久性細胞損傷。超聲輔助轉染或超聲穿孔涉及使用微泡技術在細胞膜上制造孔,以減輕遺傳物質的轉移,而激光照射輔助轉染使用激光束在質膜上制造小孔,允許外來遺傳物質進入。與電穿孔一樣,超聲穿孔和激光輔助轉染也有破壞細胞膜和不可逆細胞死亡的風險。相比之下,磁輔助轉染,或使用磁力來幫助轉移外來遺傳物質的磁轉染,似乎對生物的破壞性較盡管效率較低,但對宿主細胞的破壞較小。另一方面,基因顯微注射涉及使用特定的針刺穿細胞,將所需的核酸注射到宿主細胞的細胞核中。然而,這項技術需要經過專門訓練的人員或機器人系統,他們可以高精度地執行程序,以防止細胞損傷,因此在基因***等臨床應用中具有重要價值。與物理或機械轉染方法相比,化學轉染涉及使用專門設計的化學品或化合物來幫助將外源核酸轉移到宿主細胞中。遼寧肺轉染試劑