ELISA與WB的原理一樣,在抗體包被的微孔板中加入待測樣品、封閉、一抗孵育,洗滌后加入酶標待測物形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,徹底洗滌后加顯色劑并用酶標儀測定吸光值,結尾用標準曲線計算外泌體表達量。ELISA能實現對外泌體特異性蛋白的定量。其他外泌體鑒定方...
外泌體提取在短時間(一周之內)使用,可以放在4度保存,如果長時間保存可以放在-20度或-80度保存。也可以將外泌體進行分裝,分別放在-20度或-80度。外泌體檢測方法:外泌體分離之后,需要經過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標志物...
當外泌體在1980年初次被發現后,其被認為是細胞排泄廢物的一種方式,如今隨著大量對其生物來源、其物質構成及運輸、細胞間信號的傳導以及在體液中的分布的研究發現外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型,其可參與到機體免疫應答、抗原提呈、細胞遷...
流式細胞技術是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法,其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升。將外泌體表面特異性標志物CD63、CD81等相應抗體進行標記,可用流式細胞儀檢測到陽性表達,從而實現對外泌體的定量。但流式細胞技術檢測時需要單顆粒懸浮液,當外泌體濃度...
外泌體的來源與特征:外泌體是一種存在于細胞外的多囊泡體,通過細胞內吞泡膜向內凹陷形成,其大小均一,直徑為40-100nm,密度為1.10-1.18g/mL。外泌體可由間充質干細胞、淋巴細胞和腫細胞細胞等多種類型細胞主動分泌釋放。外泌體內主要含有核酸、蛋白質和脂...
ELISA與WB的原理一樣,在抗體包被的微孔板中加入待測樣品、封閉、一抗孵育,洗滌后加入酶標待測物形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,徹底洗滌后加顯色劑并用酶標儀測定吸光值,結尾用標準曲線計算外泌體表達量。ELISA能實現對外泌體特異性蛋白的定量。其他外泌體鑒定方...
被特定部位的細胞獲取的瘤子外泌體可為肉瘤的轉移準備轉移前微環境。用肺轉傾向的肉瘤細胞來源的外泌體處理小鼠后可使骨轉傾向的肉瘤細胞重新定向。外泌體的蛋白質組學分析發現不同部位傾向性的肉瘤細胞來源的外泌體具有不同的整合素(integrin)表達譜,整合素α6β4和...
外泌體的提取、純化和鑒定:每一個外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體,并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體。另外利用外泌體自身的物理化學性質所研發的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達到分離效果。...
為什么超速離心提取外泌體看不到沉淀?答:這種問題通常有三種可能性,其一:使用的細胞上清或者血清量太低,從而造成了這樣的結果。其二:使用了不透明的超速離心管,一般來說外泌體產量都比較小,所以凡是不透明的管子,基本都是比較難見到明顯沉淀的,可以當做有沉淀,然后操作...
外泌體中常見的細胞質蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。它可以調節外泌體膜與受體細胞的融合,有文獻報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現在早期以及回收的核內體中,RAB7和RAB9主要出現在晚期的核內體。現有大量的研究發現外泌體中含有40種R...
免疫印跡或蛋白質印跡是分析外泌體較常用的方法之一,其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結合。首先對樣品進行處理將囊泡裂解并將蛋白質變性,變性后,通過SDS-PAGE分離蛋白質,然后將其轉移到硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上并暴露于針對目的抗原的抗體中。抗...
為什么超速離心提取外泌體看不到沉淀?答:這種問題通常有三種可能性,其一:使用的細胞上清或者血清量太低,從而造成了這樣的結果。其二:使用了不透明的超速離心管,一般來說外泌體產量都比較小,所以凡是不透明的管子,基本都是比較難見到明顯沉淀的,可以當做有沉淀,然后操作...
外泌體的提取、純化和鑒定:每一個外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體,并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體。另外利用外泌體自身的物理化學性質所研發的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達到分離效果。...
外泌體的脂質和蛋白質組成可以影響它們的藥代動力學特性,它們的天然成分可能在提高生物利用度和減少不良反應方面發揮作用。除了它們的診療潛力,外泌體也有幫助疾病診斷的潛力。它們已經在所有的生物液體中被報道,并且通過生物液體取樣(液體活組織檢查)可以比較容易地獲得外泌...
外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(如細胞因子、生長因子)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質,在體內參與細胞通訊、細胞遷移、促血管新生和抗瘤子免疫等生理過程,與多種疾病的發生和進程密切相關。由于外泌體的特殊結構和功能,使得它具有潛在的應用價值,一方面...
AFC自動收集器是將qEV分離法這一過程自動化的儀器,將用來收集外泌體樣本的微量離心管放置在AFC的中間轉盤內,根據稱重精確測量流體體積,可精確的測量到樣品中每一個液滴的重量并精確測量總重量。將在空隙體積之前從qEV柱洗脫的流體收集到AFC轉盤的單獨中心孔中并...
細胞攝取診療性外泌體:從樹突狀細胞、成纖維細胞和間充質細胞中分離出的診療性外泌體可對靶細胞產生特定的作用,包括新抗原呈遞、免疫調節和藥物有效載荷傳遞。診療性外泌體對靶細胞的影響可能是通過不同的進入或相互作用機制來控制的。完整的外泌體的進入可能包括受體介導的內吞...
根據內侵量的不同,可以產生不同尺寸、不同含量的ILV。LSEs產生的MVBs具有確定的ILV聚集(未來的外泌體)。MVBs可以與自噬體融合,較終其內容物在溶酶體中降解。降解產物可被細胞回收利用。MVBs也可以直接與溶酶體融合降解。不遵循這一軌跡的MVBs可通過...
外泌體病毒傳染:外泌體可以限制或促進病毒傳染。如IFNα或APOBEC3G等外泌體載體可通過限制病毒復制或增強抗病毒免疫來阻止傳染。病毒也可以劫持外泌體的生物發生機制來促進病毒的傳播。外泌體可以作為一個假包膜,通過四聚體蛋白(CD81,CD9)和PtSer相互...
外泌體是細胞分泌到胞外的一種囊泡,其大小為30-150nm,具有雙層膜結構和茶托狀形態,含有豐富的內含物(包括核酸、蛋白和脂質等),參與細胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細胞培養上清以及各種體液中,包括血液、唾液、尿液、乳汁等,同時也存在于組織樣本中,如腦組織...
血漿中的外泌體蛋白既可以當作標志物,也可以進行機理研究?首先,研究人員將慢性淋巴瘤(CLL)患者分為2個亞組:疾病進展期和疾病慢性期。然后利用質譜技術分析了患者血漿外泌體蛋白組,發現S100-A9蛋白在進展期CLL患者中明顯高表達,可以作為CLL進展期診斷的輔...
外泌體生物學功能:1、在心血管系統中,據報道,源自人胚胎干細胞(ESC)的間充質干細胞(MSC)外泌體可減少小鼠和豬模型中的心肌缺血和再灌注損傷;2、在免疫系統中,據報道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細胞之間轉移是細胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機制;3、在中...
透射電子顯微鏡(TEM)和掃描電子顯微鏡(SEM)是用于評估外泌體形態、大小和表型的的兩種常見的電子顯微鏡。SEM和TEM均使用電子束產生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像,以區分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒,該方法還可用于檢查樣品的純度。TEM與SE...
近年來,外泌體的捕獲技術越來越多,微流體系也被用于外泌體提取,此方法能根據其物理和生化特性同時分離外泌體。采用這種方法獲得的樣品純度高,且可及時獲取外泌體用于疾病的相關檢測。在初次注射時外泌體粘附在微流控設備的內表面,并在隨后的PBS注射中沖洗掉。此方法采用的...
密度梯度離心法根據在蔗糖、碘海醇或碘克沙醇等惰性溶液中的浮力密度將外泌體分成特定的層,目前普遍應用的是蔗糖,這種方法可以成功地將亞細胞成分(例如過氧化物酶體,線粒體和核內體)分離到密度梯度溶液中的不同層中。樣品被放置在梯度的頂部,當施加離心力時,樣品中的顆粒以...
磁珠免疫法分離外泌體:將針對目的抗原的抗體通過生物素-鏈霉親和素連接到磁珠表面,然后將磁珠與樣品共孵育,使外泌體特異性結合到磁珠上形成磁珠-外泌體復合物,再用蒸餾水或者PBS沖洗,結尾用甘氨酸-Tris-HCl溶液洗脫獲得外泌體。該方法相對于ELISA的好處主...
NTA技術已被作為外泌體表征手段之一,相較于其他表征方式NTA技術的樣本處理更簡單、更能保證外泌體原始狀態、檢測速度更快。大致方法是:將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀,用激光光束穿過樣本,激光在腔室內與顆粒相互作用時會發生散射,通過裝有攝像頭的顯微鏡收...
流式細胞技術是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法,其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升。將外泌體表面特異性標志物CD63、CD81等相應抗體進行標記,可用流式細胞儀檢測到陽性表達,從而實現對外泌體的定量。但流式細胞技術檢測時需要單顆粒懸浮液,當外泌體濃度...
外泌體分離的主要挑戰之一是消除納米級污染物,包括干擾外泌體標志物解析的游離核酸和脂蛋白。超速離心是目前分離外泌體的主要技術。盡管如此,它仍難以符合臨床應用所需的標準,主要是由于該方法得到的外泌體純度不足,產量較低,完整性欠佳且分離純化操作耗時長。其他方法,例如...
免疫印跡或蛋白質印跡是分析外泌體較常用的方法之一,其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結合。首先對樣品進行處理將囊泡裂解并將蛋白質變性,變性后,通過SDS-PAGE分離蛋白質,然后將其轉移到硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上并暴露于針對目的抗原的抗體中。抗...