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紹興藥理學膜片鉗技術研究方案

來源: 發布時間:2023-05-27

膜片鉗技術操作方法:開始封接:調低微操步進速度,使電極尖銳端慢慢向細胞靠近,如發現基線方波突然變小,封接電阻上升時,即停止電極下降,通過注射器給電極負壓,封接成功的可見方波很快變小,電阻升至G歐。此時,調節快電容補償按鈕,將快電容電流補償掉,如封接穩定后,準備破膜。破膜:在鉗制電位水平-60mV時,漏電流<20pA,給予比較大的負壓(也可根據情況使用ZAP電破方式破膜),將要破時可見基線上下浮動,破后,可見基線前后有兩個較大的慢電容電流。膜片鉗的應用:在通道電流記錄中,可分別于不同時間、不同部位施加各種濃度的藥物來研究。紹興藥理學膜片鉗技術研究方案

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膜片鉗使用操作流程及注意事項:1.實驗結束后必須關閉實驗室的水電,檢查實驗室門窗。2.凡是在本平臺使用儀器的同學必須履行實驗室相關要求,完成值日等相關工作(值日生按照實驗室統一所發值日生要求履職)。3.在儀器使用以前及使用之后按按照使用時長做好登記工作。4.拉制儀提前預熱(至少30min)。且用完及時關閉。電熱加熱線溫度很高,在使用時注意避免燙傷。4.電腦里面的軟件不得隨意刪改,不得在本機電腦下載別的軟件,拷數據時需用實驗室配置的U盤。5.禁止私拉電線,如有實驗要求可與老師及時溝通。膜片鉗技術用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數量級,因此封接范圍內細胞膜光有少數離子通道。杭州醫學膜片鉗全細胞記錄方案膜片鉗技術的應用范圍:創新藥物研究與高通量篩選的研究。

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膜片鉗的應用:對單細胞形態與功能關系的研究:將膜片鉗技術與單細胞逆轉錄多聚酶鏈是反應技術結合,在全細胞膜片鉗記錄下,將單細胞內容物或整個細胞(包括細胞膜)吸入電極中,將細胞內存在的各種mRNA全部快速逆轉錄成cDNA,再經常規PCR擴增及待檢的特異mRNA的檢測,借此可對形態相似而電活動不同的結果做出分子水平的解釋或為單細胞逆轉錄多聚酶鏈式反應提供標本,為同一結構中形態非常相似但功能不同的事實提供分子水平的解釋。

膜片鉗技術被稱為研究離子通道的“金標準”。是研究離子通道的較重要的技術。目前膜片鉗技術已從常規膜片鉗技術(Conventionalpatchclamptechnique)發展到全自動膜片鉗技術(Automatedpatchclamptechnique)。傳統膜片鉗技術每次只能記錄一個細胞(或一對細胞),對實驗人員來說是一項耗時耗力的工作,它不適合在藥物開發初期和中期進行大量化合物的篩選,也不適合需要記錄大量細胞的基礎實驗研究。全自動膜片鉗技術的出現在很大程度上解決了這些問題,它不只通量高,一次能記錄幾個甚至幾十個細胞,而且從找細胞、形成封接、破膜等整個實驗操作實現了自動化,免除了這些操作的復雜與困難。這兩個優點使得膜片鉗技術的工作效率很大程度提高了!簽于全自動膜片鉗技術的這些優點,目前已經普遍的用于藥物篩選。全自動膜片鉗系統技術指標:藥物消耗極低。每次更換的外液只需十幾微升。

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膜片鉗技術及其應用:它是作者在\"膜片鉗技術及其應用\"領域所進行的研究工作的總結,同時也吸取了國際上的先進技術和新近的研究成果。內容包括:細胞電生理與膜片鉗技術,膜片鉗系統的組建及實驗技術概要,膜片鉗放大器原理與低噪聲設計,單通道和全細胞電流記錄技術,數據采集和分析,細胞分泌活動的膜電容監測技術和安培測量技術,細胞內鈣離子濃度的測量及鈣庫特性,腦切片膜片鉗技術,心肌細胞的藥理特性和植物細胞的離子通道特性。膜片鉗使用操作注意:禁止私拉電線,如有實驗要求可與老師及時溝通。湖州全自動膜片鉗實驗服務

膜片鉗技術的應用范圍:對藥物作用機制的研究。紹興藥理學膜片鉗技術研究方案

膜片鉗技術本質上也屬于電壓鉗范疇,兩者的區別關鍵在于:①膜電位固定的方法不同;②電位固定的細胞膜面積不同,進而所研究的離子通道數目不同。電壓鉗技術主要是通過保持細胞跨膜電位不變,并迅速控制其數值,以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個細胞膜或一大塊細胞膜上所有離子通道活動。目前電壓鉗主要用于巨大細胞的全性能電流的研究,特別在分子克隆的卵母細胞表達電流的鑒定中發揮著其他技術不能替代的作用。紹興藥理學膜片鉗技術研究方案

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