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寧波細胞生物學膜片鉗技術研究方案

來源: 發布時間:2023-06-07

膜片鉗技術的工作原理:膜片鉗技術是用于了解離了通道行為的通用型電生理工具,首先用微玻管電極(膜片電極或膜片吸管)接觸細胞膜,然后以千兆歐姆以上的阻抗使電極尖銳端與細胞膜封接,通過吸破或者電破的方式使與電極尖開口處相接的細胞膜的小區域與其周圍區域在電學上分隔,然后細胞膜破裂,進而對此區域上的離子通道的離子電流進行監測記錄的方法。該方法普遍應用于神經細胞,肌纖維細胞,心肌細胞及高表達單一通道的卵母細胞。主要用于監測離子通道在正常或者疾病狀態下如何表現,以及不同藥物、離子或其他分析物如何改變這些狀態。膜片鉗技術的建立,對生物科學特別是神經科學是一項具有重大意義的變革。這是一種通過離子通道記錄的離子電流來反映細胞膜單一的(或多個)的離子通道活動的技術。該技術的出現將生理學的細胞水平和分子水平聯系在一起,又將神經科學的不同亞科融匯在一起,促進了各個學科之間的聯系,加速了我們神經科學的研究進展,深入探討神經活動的機制研究。膜片鉗使用操作注意:封接范圍內細胞膜光有少數離子通道。寧波細胞生物學膜片鉗技術研究方案

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膜片鉗電生理技術服務:膜片鉗技術的建立,對生物學科學特別是神經科學是一資有重大意義的變革。這是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜單一的(或多個的離子通道分子活動的技術。些技術的出現自然將細胞水平和分子水平的生理學研究聯系在一起,同時又將神經科學的不同分野必然地融匯在一起,改變了既往各個分野互不聯系、互不滲透,阻礙人們很全認識能力的弊端。由于電極與細胞膜的高阻封接,在電極籠罩下的那片膜事實上與膜的其他部分從電學上隔離,因此,此片膜內開放所產生的電流流進玻璃吸管,用一個極為敏感的電流監視器(膜片鉗放大器)測量此電流強度,就替代單一離子通道電流。膜片鉗技術的基本原理是通過負反饋使得膜電位與指令電壓相等,在電壓鉗制的條件下記錄膜電流。杭州藥理學膜片鉗實驗原理膜片鉗使用操作注意:禁止私拉電線,如有實驗要求可與老師及時溝通。

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膜片鉗芯片技術是繼細胞芯片之后的又一種嶄新的分析細胞電生理參數的芯片技術.由于該芯片除了具有傳統膜片鉗的高分辨和高準確性特點外,還具有高通量、自動化以及細胞多通道參數和細胞網絡參數在線和實時檢測等優點.因此,該芯片技術將很大促進細胞離子通道、細胞網絡傳導以及藥物篩選的研究和應用.文中具體介紹了膜片鉗芯片技術的發展及其應用,結合作者的研究工作,著重介紹了膜片鉗芯片技術在味覺細胞研究的比較新進展,并結合神經芯片研究細胞網絡的方法,對采用膜片鉗芯片技術在細胞和分子水平上研究味覺的敏感機理和傳導機制的應用前景進行了展望。

電壓鉗與膜片鉗有什么區別?電壓鉗技術是通過向細胞內注射一定的電流,抵消離子通道開放時所產生的離子流,從而將細胞膜電位固定在某一數值。由于注射電流的大小與離子流的大小相等、方向相反,因此它可以反映離子流的大小和方向。膜片鉗技術鉗制的是膜片,是指采用尖銳端經過處理的微電極與細胞膜發生緊密接觸,使尖銳端下的這片細胞膜在電學上與其它細胞膜分離,這很大程度降低了背景噪聲,使單通道微弱的電流得以分辨出來。采用電壓鉗技術將這片膜的電位鉗制在某一數值,可記錄到單通道電流。從這點上看,膜片鉗技術是特殊的電壓鉗技術。隨著膜片鉗技術的發展,它已經不只只局限于膜片的概念,也不只只采用電壓鉗技術,還常采用電流鉗技術。膜片鉗使用的注意事項:在放大器打開時不能用手、金屬物品或其它導電的物品接觸電極絲。

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膜片鉗使用操作流程及注意事項:1.實驗結束后必須關閉實驗室的水電,檢查實驗室門窗。2.凡是在本平臺使用儀器的同學必須履行實驗室相關要求,完成值日等相關工作(值日生按照實驗室統一所發值日生要求履職)。3.在儀器使用以前及使用之后按按照使用時長做好登記工作。4.拉制儀提前預熱(至少30min)。且用完及時關閉。電熱加熱線溫度很高,在使用時注意避免燙傷。4.電腦里面的軟件不得隨意刪改,不得在本機電腦下載別的軟件,拷數據時需用實驗室配置的U盤。5.禁止私拉電線,如有實驗要求可與老師及時溝通。膜片鉗技術是用來研究單個離體的活細胞、組織切片或細胞膜片離子流的電生理實驗技術。廈門藥理學腦定位膜片鉗原理及步驟

膜片鉗的應用:對藥物作用機制的研究。寧波細胞生物學膜片鉗技術研究方案

膜片鉗的應用:對藥物作用機制的研究:在通道電流記錄中,可分別于不同時間、不同部位(膜內或膜外)施加各種濃度的藥物,研究它們對通道功能的可能影響,了解那些選擇性作用于通道的藥物影響人和動物生理功能的分子機理。這是膜片鉗技術應用較普遍的領域,既有對西藥藥物機制的探討,也普遍用在重要藥理的研究上。如開麗等報道細胞貼附式膜片鉗單通道記錄法觀測到人參二醇組皂苷可抑制正常和“缺血”誘導的大鼠大腦皮層神經元L-型鈣通道的開放,從而減少鈣內流,對缺血細胞可能有保護作用。陳龍等報道采用細胞貼附式單通道記錄法發現烏頭堿對培養的Wistar大鼠心室肌細胞L-型鈣通道有阻滯作用。寧波細胞生物學膜片鉗技術研究方案

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