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連云港細胞生物學膜片鉗技術(shù)服務

來源: 發(fā)布時間:2023-07-08

全細胞膜片鉗模式下有電壓鉗記錄和電流鉗記錄兩種。電壓鉗記錄的原理與電壓鉗技術(shù)相似,但有所不同:首先,全細胞電壓鉗記錄只使用單根電極,但在電學效果上同時實現(xiàn)了電壓鉗制和電流記錄。其次,電壓鉗記錄的電極不細胞,對細胞造成的損傷較小,因而能用于小細胞如神經(jīng)元的研究。電流鉗記錄則是通過鉗制電極電流來測量膜電位。電流鉗在本質(zhì)上也是電壓鉗位,它將差分放大器的輸出電流與指令電流相比較,然后將這個差動輸出施加到放大器前級的倒相端,通過高速反饋使得同相端的電壓與其相等,無論電極電流是否為零,都能從輸出電壓得到膜電位的準確數(shù)值。膜片鉗使用操作流程及注意事項:凡是在本平臺使用儀器的同學必須履行實驗室相關要求。連云港細胞生物學膜片鉗技術(shù)服務

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膜片鉗電生理技術(shù)服務實驗流程之標本制備和膜片鉗實驗系統(tǒng):標本制備:根據(jù)研究目的的不同,可采用不同的細胞組織,如心肌細胞、平滑肌細胞、腫瘤細胞等,現(xiàn)在幾乎可對各種細胞進行膜片鉗的研究。對所采用的細胞,必須滿足實驗要求,一般多采用酶解分離法,也可采用細胞培養(yǎng)法;另外,由于與分子生物學技術(shù)的結(jié)合,現(xiàn)在也運用分子克隆技術(shù)表達不同的離子通道,如利用非洲爪蟾卵母細胞表達外源性基因等。膜片鉗實驗系統(tǒng):根據(jù)不同的電生理實驗要求,可以組建不同的實驗系統(tǒng),但有若干共同的基本部件,包括機械部分(防震工作臺、屏蔽罩、儀器設備架)、光學部分(顯微鏡、視頻監(jiān)視器、單色光系統(tǒng))、電子部件(膜片鉗放大器、刺激器、數(shù)據(jù)采集設備、計算機系統(tǒng))和微操縱器。南通藥理學膜片鉗電生理技術(shù)研究方案全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標:信號準確,噪聲少,使用了先進的微型“法拉第板”替代傳統(tǒng)的“法拉第籠”。

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一種提高膜片鉗實驗效率的方法與流程:膜片鉗技術(shù)是一種記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜上離子通道分子活動的技術(shù)。是用來研究單個離體的活細胞、組織切片或細胞膜片離子流的電生理實驗技術(shù)。這項技術(shù)在可興奮細胞如神經(jīng)元、心肌細胞、肌纖維和胰腺細胞的研究中起至關重要的作用,也可用于研究特殊制備的巨型球狀體中的細菌離子通道。傳統(tǒng)膜片鉗技術(shù)對實驗人員的技術(shù)要求非常高,一般地,實驗人員需要經(jīng)過嚴格的長期的訓練,才能準確且快速的操作。

膜片鉗在通道研究中的重要作用:對離子通道生理與病理情況下作用機制的研究:通過對各種生理或病理情況下細胞膜某種離子通道特性的研究,了解該離子的生理意義及其在疾病過程中的作用機制。如對鈣離子在腦缺血神經(jīng)細胞損害中作用機制的研究表明,缺血性腦損害過程中,Ca2+ 介導現(xiàn)象起非常重要的作用,缺血缺氧使Ca2+通道開放,過多的Ca2+進入細胞內(nèi)就出現(xiàn)Ca2+超載,導致神經(jīng)元及細胞膜損害,膜轉(zhuǎn)運功能障礙,嚴重的可使神經(jīng)元壞死。膜片鉗和電壓鉗的區(qū)別:電位固定的細胞膜面積不同,進而所研究的離子通道數(shù)目不同。

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膜片鉗的應用:對藥物作用機制的研究:在通道電流記錄中,可分別于不同時間、不同部位(膜內(nèi)或膜外)施加各種濃度的藥物,研究它們對通道功能的可能影響,了解那些選擇性作用于通道的藥物影響人和動物生理功能的分子機理。這是膜片鉗技術(shù)應用較普遍的領域,既有對西藥藥物機制的探討,也普遍用在重要藥理的研究上。如開麗等報道細胞貼附式膜片鉗單通道記錄法觀測到人參二醇組皂苷可抑制正常和“缺血”誘導的大鼠大腦皮層神經(jīng)元L-型鈣通道的開放,從而減少鈣內(nèi)流,對缺血細胞可能有保護作用。陳龍等報道采用細胞貼附式單通道記錄法發(fā)現(xiàn)烏頭堿對培養(yǎng)的Wistar大鼠心室肌細胞L-型鈣通道有阻滯作用。膜片鉗使用的注意事項:干燥季節(jié)請先用手觸摸金屬框架釋放身體的靜電。常州細胞生物學膜片鉗全細胞記錄原理

膜片鉗的應用:與藥物作用有關的心肌離子通道。連云港細胞生物學膜片鉗技術(shù)服務

膜片鉗使用操作流程及注意事項:1.實驗結(jié)束后必須關閉實驗室的水電,檢查實驗室門窗。2.凡是在本平臺使用儀器的同學必須履行實驗室相關要求,完成值日等相關工作(值日生按照實驗室統(tǒng)一所發(fā)值日生要求履職)。3.在儀器使用以前及使用之后按按照使用時長做好登記工作。4.拉制儀提前預熱(至少30min)。且用完及時關閉。電熱加熱線溫度很高,在使用時注意避免燙傷。4.電腦里面的軟件不得隨意刪改,不得在本機電腦下載別的軟件,拷數(shù)據(jù)時需用實驗室配置的U盤。5.禁止私拉電線,如有實驗要求可與老師及時溝通。連云港細胞生物學膜片鉗技術(shù)服務

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