膜片鉗技術之全細胞記錄的實驗流程：（1）破膜：加大微電極內的負壓將細胞膜吸破，此時可見時間常數較大的全細胞膜電容電流的出現，以及方波電流的輕微加大。①可用嘴吸；②也可用注射器施加負壓；③還可以在施加負壓的基礎上進行電擊穿來破膜。若只用電擊穿破膜，形成的入口電阻Ra較大。（2）細胞破膜后，若所用浴液的滲透壓比電極內液的滲透壓略高，則應該將所施加的負壓力在幾秒內或幾十秒內去掉；反之，適當保留一點負壓對破膜狀態及細胞的穩定更有利。（3）全細胞膜電容補償：調節全細胞膜電容補償板塊中的Cm和Rs進行膜電容電流補償，使輸出電流信號中細胞膜電容電流成分消失或變至較小。（4）串聯電阻補償：打開串聯電阻補償鍵，調節串聯電阻補償至不產生震蕩為度。（5）漏減調節。（6）正式進入標本細胞的檢測。膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質分子對相應離子通透難易程度等特性的一種實驗技術。紹興神經生物學膜片鉗電生理技術應用

膜片鉗記錄的幾種形式：內面向外膜片(inside-out patch)　高阻封接形成后，在將微管電極輕輕提起，使其與細胞分離，電極端形成密封小泡，在空氣中短暫暴露幾秒鐘后，小泡破裂再回到溶液中就得到“內面向外”膜片。此時膜片兩側的膜電位由固定電位和電壓脈沖控制。浴槽電位是地電位，膜電位等于玻管電位的負值。如放大器的電流監視器輸出是非反向的，則輸出將與膜電流(Im)的負值相等。外面向外膜片(out-side patch)　高阻封接形成后，繼續以負壓抽吸，膜片破裂再將玻管慢慢地從細胞表面垂直地提起，斷端游離部分自行融合成脂質雙層，此時高阻封接仍然存在。而膜外側面接觸浴槽液。杭州全自動電生理膜片鉗研究方案膜片鉗使用的注意事項：安裝玻璃微電極時，電極應與銀絲平行，防止刮蹭銀絲電極。

膜片鉗技術的工作原理：膜片鉗技術是用于了解離了通道行為的通用型電生理工具，首先用微玻管電極(膜片電極或膜片吸管)接觸細胞膜，然后以千兆歐姆以上的阻抗使電極尖銳端與細胞膜封接，通過吸破或者電破的方式使與電極尖開口處相接的細胞膜的小區域與其周圍區域在電學上分隔，然后細胞膜破裂，進而對此區域上的離子通道的離子電流進行監測記錄的方法。該方法普遍應用于神經細胞，肌纖維細胞，心肌細胞及高表達單一通道的卵母細胞。主要用于監測離子通道在正常或者疾病狀態下如何表現，以及不同藥物、離子或其他分析物如何改變這些狀態。膜片鉗技術的建立，對生物科學特別是神經科學是一項具有重大意義的變革。這是一種通過離子通道記錄的離子電流來反映細胞膜單一的(或多個)的離子通道活動的技術。該技術的出現將生理學的細胞水平和分子水平聯系在一起，又將神經科學的不同亞科融匯在一起，促進了各個學科之間的聯系，加速了我們神經科學的研究進展，深入探討神經活動的機制研究。

膜片鉗技術——打開細胞電生理之門：定義：膜片鉗技術被稱為研究離子通道的“金標準”，是一種基于電工學和電化學原理的分析手段，可以通過檢測細胞的電信號(電生理性質)來研究化學物質、電、機械力等刺激因素對細胞功能的影響，從而幫助揭示細胞在生命活動中的化學和生物學機制。原理：膜片鉗技術是用玻璃微電極吸管把只含1-3個離子通道、面積為幾個平方微米的細胞膜通過負壓吸引封接起來，由于電極與細胞膜的高阻封接，在電極籠罩下的那片膜事實上與膜的其他部分從電學上隔離，因此，此片膜內開放所產生的電流流進玻璃吸管，用一個極為敏感的電流監視器（膜片鉗放大器）測量此電流強度，就替代單一離子通道電流。膜片鉗使用操作注意：拉制儀提前預熱（至少30min）。且用完及時關閉。

膜片鉗技術被稱為研究離子通道的“金標準”。是研究離子通道的較重要的技術。目前膜片鉗技術已從常規膜片鉗技術（Conventionalpatchclamptechnique）發展到全自動膜片鉗技術（Automatedpatchclamptechnique）。傳統膜片鉗技術每次只能記錄一個細胞（或一對細胞），對實驗人員來說是一項耗時耗力的工作，它不適合在藥物開發初期和中期進行大量化合物的篩選，也不適合需要記錄大量細胞的基礎實驗研究。全自動膜片鉗技術的出現在很大程度上解決了這些問題，它不只通量高，一次能記錄幾個甚至幾十個細胞，而且從找細胞、形成封接、破膜等整個實驗操作實現了自動化，免除了這些操作的復雜與困難。這兩個優點使得膜片鉗技術的工作效率很大程度提高了！簽于全自動膜片鉗技術的這些優點，目前已經普遍的用于藥物篩選。膜片鉗的應用：對單細胞形態與功能關系的研究。杭州全自動電生理膜片鉗研究方案

膜片鉗使用的注意事項：換液時應時刻觀察浴槽，防止液面過低或液體溢出污染鏡頭。紹興神經生物學膜片鉗電生理技術應用

全自動膜片鉗系統技術指標：1）操作簡單，全過程可自動化。2）實驗迅速，通量高。一般每天可達到50個實驗數據左右。3）藥液交換迅速。細胞內、外液的交換是在平面芯片上進行，所以藥液交換非常迅速，作用時間快，外灌流時間常數：~200ms內灌流時間常數：~2s。4）藥物消耗極低。每次更換的外液只需十幾微升。5）信號準確，噪聲少。使用了先進的微型“法拉第板”替代傳統的“法拉第籠”，極大的減少了噪聲源，記錄數據的電噪音很低(小于300fA/500MΩ)。6）擴展功能多。配套擴展設備豐富，如內灌流系統、溫度控制系統、脂質體制備器等等。7）軟件強大。軟件的功能全部，可按照操作者設定的參數方案自動執行實驗，進行細胞吸附、封接和維持全細胞記錄模式；并兼容常規膜片鉗放大。紹興神經生物學膜片鉗電生理技術應用

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